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您知道细胞冻存与复苏吗?
点击次数:85 发布时间:2019-09-24
 

    漫漫人生路,谁都难免会遭遇各种失落或厄运。在凄风苦雨惨雾愁云的检测面前,一个强者,是不会向命运垂头的。风再冷,不会永远不息;雾再浓,不会经久不散。风息雾散,仍是阳光灿烂。接下来给大家讲讲细胞冻存与复苏 。

    细胞冻存

    1.试验前预备:细胞室及工作台紫外线照耀15min;培育液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水浴箱37℃预热备用;搜集对数生长期细胞,在冻存前一天zui好换液

    2.用吸管吸出培育瓶中的细胞培育液,PBS清洗2遍吸出冲洗液,参加适量胰蛋白酶消化。

    3.当令去掉胰蛋白酶,参加少数新培育液。吸管汲取培育液吹打瓶壁上的细胞,使其成为均匀涣散的细胞悬液。

    4.用吸管将培育液参加冻存管中,离心(1000r/min,10分钟)。

    5.去上清液,参加与细胞悬液等量的冻存液,用吸管悄悄吹打使细胞均匀

    6.冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16~18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期贮存。-20℃不可超越1h,以避免胞内冰晶过大,造成细胞很多损坏,亦可跳过此过程直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微下降一些。

    7.记载每一个冷冻管的位置以保证在今后应用时可以找到每一个冷冻管。

    细胞复苏

    1.室内紫外消毒;培育基、PBS于37℃恒温水浴预热备用。

    2.自液氮罐中取出冷冻管,立即放入37℃水槽中快速冻结,离心。
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    3.去上清,参加培育基,吹打,然后移入培育瓶中,用培育基清洗冻存管,清洗液也移入培育瓶中。

    4.于培育瓶中参加适量培育基,放入CO2培育箱中培育

    5.记载复苏日期;次日换液。

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